免费蛋白质浓度计算器

使用A280方法计算蛋白质浓度

该蛋白质浓度计算器是一个免费的在线工具，应用比尔-朗伯定律，通过280 nm的紫外吸光度确定蛋白质浓度。通常称为A280蛋白质检测法，该技术快速、无损且无需额外试剂，非常适合纯化蛋白的常规定量。

比尔-朗伯关系

核心公式为：

$$A = \varepsilon \cdot b \cdot C$$

其中 $A$ 是280 nm处的吸光度，$\varepsilon$ 是摩尔消光系数（单位为 $\text{M}^{-1}\text{cm}^{-1}$），$b$ 是比色皿的光程（单位 cm），$C$ 是摩尔浓度（M）。要得到以 mg/mL 为单位的质量浓度，将公式扩展为包含分子量 $m$ (g/mol) 和稀释因子 $n$：

$$C_{\text{mg/mL}} = \frac{A}{\varepsilon \cdot b} \times m \times n$$

将结果乘以1000得到以 µg/mL 为单位的浓度。

需要提供的参数

需要提供五个值：

• 吸光度 ($A$): 用分光光度计测量的280 nm处光密度。为了最佳准确性，将读数保持在0.1–1.0范围内。
• 消光系数 ($\varepsilon$): 取决于色氨酸、酪氨酸和半胱氨酸含量的蛋白质特异性常数。可以在蛋白质的文档或下面的参考表中找到。
• 光程 ($b$): 标准比色皿通常为1 cm。如果使用不同的比色皿，请输入其内部宽度。
• 分子量 ($m$): 蛋白质的摩尔质量 (g/mol)。计算器中预置了许多常见蛋白质的值；对于其他蛋白质，您可以在已发表文献中查找质量。
• 稀释因子 ($n$): 如果测量未稀释的原液，设置为1。对于稀释的样本，$n$ 是稀释比的倒数（例如，1:2稀释为2，1:10稀释为10）。

逐步示例

让我们通过以下数据确定免疫球蛋白G (IgG) 样本的浓度：

• 消光系数：210,000 M⁻¹ cm⁻¹
• 分子量：150,000 g/mol
• 测量吸光度：0.55
• 比色皿光程：1 cm
• 稀释因子：5 (1:5稀释)

将这些值代入公式：

$$C = \frac{0.55}{210,000 \times 1} \times 150,000 \times 5 = \frac{0.55}{210,000} \times 750,000 \approx 1.964\ \text{mg/mL}$$

因此，原液浓度约为1.96 mg/mL (1960 µg/mL)。

消光系数和分子量参考表

下表列出了计算器中预置的所有蛋白质和氨基酸的参数。数据来源于BioSynthesis USA及von Hippel & Gill，在280 nm下测量。

物质	分子量 (g/mol)	消光系数 (M⁻¹ cm⁻¹)
醛糖	38,994	34.380
APC – 别藻蓝蛋白	105,000	700,000
ATP	507.2	15,400
BSA – 牛血清白蛋白	66,463	43,824
半胱氨酸	121.16	120
IgG – 免疫球蛋白G	150,000	210,000
胰岛素	5,734	6,335
溶菌酶	14,000	37,901
PE – 藻红蛋白	240,000	1,960,000
苯丙氨酸	165.19	200
核糖核酸酶A	13,700	9,440
链霉亲和素	55,000	176,000
色氨酸	204.23	5,500
酪氨酸	181.19	1,490

如果您使用的蛋白质不在此列表中，计算器提供“自定义”选项，允许您手动输入消光系数和分子量。

该工具简化了A280蛋白质检测工作流程，消除了手动计算，减少了算术错误的可能。